לדלג לתוכן

IDISCO

מתוך המכלול, האנציקלופדיה היהודית

iDISCO (קיצור של "דימות תלת-ממדי של איברים מצוהרים מסומנים באמצעות נוגדנים", "immunolabeling-enabled three-dimensional imaging of solvent-cleared organs")[1] היא שיטה היסטולוגית לציהור רקמות ביולוגיות באמצעות סדרה של ממסים אורגניים להשוואה הדרגתית של מקדם השבירה של הרקמות במטרה להפחית את פיזור האור ברקמה. ניתן לבחון מבנים ברקמות שקופות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ללא צורך בחיתוך הרקמה לפרוסות – תהליך הגוזל זמן רב ומצריך שחזור ממוחשב מועד-לטעויות של ההקשר המרחבי בין הפרוסות השונות.

מוח מצוהר שלם של עכבר מעבדה המבטא חלבון פלואורני מסוג GFP בתאי העצב שלו

השיטה פותחה על ידי צוותם של עלי ארטורק (אנ') והנס-אולריך דודט במכון מקס פלאנק לפסיכיאטריה (אנ') במינכן,[1][2] והיא נועדה בעיקר לציהור ודימות של דגימות מוח וחוט שדרה של עכברים שלא נפרסו לחתכים. בהמשך, השיטה המקורית ונגזרות שונות שלה שימשו בהצלחה בתחומים רבים של מחקר ביולוגי כדי לדמות ולחקור את כל גופם של עכברים,[3] מבנה ותפקוד במוח העכבר,[1] תאי גזע,[4][5] גידולים ממאירים,[6][7][8] תהליכי התפתחות,[9][10] ואף עוברים אנושיים שלמים.[11]

היסטוריה ופיתוח השיטה

ערך מורחב – ציהור רקמות

השימוש בממסים אורגניים לציהור רקמות הוזכר לראשונה לפני יותר ממאה שנה על ידי האנטומיסט הגרמני ורנר ספאלטהולץ.[12][13] אך למעט כמה יוצאים מן הכלל,[13][14] (נסקר ב-[15]) נשכחו רוב שיטות הציהור במרוצת המאה ה-20. העניין בהן גבר בעשור השני של המאה ה-21, בין היתר עם הבשלת שיטות מתקדמות במיקרוסקופיה פלואורונית, שאפשרו חיתוך אופטי של דוגמאות עבות: מיקרוסקופיה קונפוקלית, מיקרוסקופיה רב-פוטונית או מיקרוסקופיית יריעת אור(אנ').[15][16]

עבור שיטת הציהור בפועל, הממס האורגני הראשון ששימש היה תערובת של אלכוהול בנזילי ובנזיל בנזואט (BABB). המחברים השתמשו בתמיסה זו כדי לצהר מוחות של עכברים, עוברי עכברים ואת כל הגוף של זבובי פירות ממין תסיסנית המחקר.[17] החיסרון העיקרי של תמיסה זו הוא פגימה בבוהק הפלואורני של חלבונים פלואורניים המבוטאים ברקמה (כגון GFP) וציהור לא מספק של רקמות עשירות במיאלין של בעלי חיים בוגרים.[1] לכן, נבדקו מגיבים רבים אחרים, במטרה למצוא תערובת שתשמר את בהירות החלבונים הפלואורניים ברקמה וגם תצהר טוב יותר את השומנים והחלבונים המעכירים את הרקמה. ככאלה, טטרהידרופורן (THF) ודיבנזיל אתר (DBE) נבחרו כחומרים המצהרים המתאימים ביותר.[18] בהתבסס על ממצאים אלה פורסם פרוטוקול 3DISCO בשנת 2012.[1] בחלוף שנתיים פורסם פרוטוקול משופר המאפשר צביעה שניונית אימונוהיסטוכימית פשוטה יחסית של החלבונים המעניינים את החוקרים וזכה לכינוי iDISCO – immunolabeling-enabled three-dimensional imaging of solvent-cleared organs.[19] הצביעה השניונית מאפשרת לצבוע את הרקמה בפלואורופורים בוהקים הרבה יותר ומגוונים יותר בהתאם לשאלת המחקר.

נוהל

פרוטוקול iDISCO מורכב מחמישה שלבים:

  1. קיבוע, לרוב עם פאראפורמלדהיד (PFA).
  2. צביעה שניונית אימונוהיסטוכימית של החלבונים הנוגעים לשאלת המחקר.
  3. ייבוש ראשוני באמצעות טטרה הידרו פוראן (THF)
  4. סילוק שומנים באמצעות השרייה בדיכלורומתאן (DCM)
  5. השרייה בדיבנזיל אתר (DBE) לצורך התאמת מקדם השבירה של הרקמה למקדם השבירה של הנוזל המשמש לדימות.

עיקרון ופרוטוקול

דגימות ביולוגיות (רקמות) הן מבנים הטרוגניים המורכבים מתרכובות הנבדלות במקדמי השבירה שלהן. לדוגמה, למים יש מקדם שבירה של 1.33, ולשומנים וחלבונים בסביבות 1.40-1.45.[20] כתוצאה מכך, האור מתפזר בדרכו דרך הרקמה העכורה, מה שמוביל לירידה ברזולוציה ולהסתרה של פרטים בדגימות העבות יותר מכמה עשרות מיקרומטרים. סדרה של שלבים הכוללים ייבוש של הרקמה וסילוק שומנים ממנה, ולאחר מכן השרייה ודימות שלה בנוזל עם מקדם שבירה דומה למבנים המצולמים, מפחיתה את פיזור האור דרך הדוגמה המצוהרת.[21][22]

לאחר קיבוע (לרוב עם פאראפורמלדהיד) וצביעה שניונית, הדגימות מיובשות באמצעות השרייה בתמיסות עם ריכוז הולך וגדל (50%, 70%, 80% ו-100% במים) של טטרה הידרו פוראן (THF). בשל היעדר קבוצות אלכוהול, אלדהיד או קטון ריאקטיביות, THF פחות ריאקטיבי ושומר על זהירה (פלואורנות) טוב יותר מתמיסות ייבוש אחרות.[22][18] לאחר הייבוש, הדגימה נשטפת תחילה בדיכלורומתאן (DCM) ולבסוף בדיבנזיל אתר (DBE) כדי להתאים את מקדם השבירה של הרקמה למקדם השבירה של הנוזל בו היא מצולמת, וכך לאפשר לאור לחדור דרך דוגמה שקופה. אחר כך כבר יותר קל לאחסן את הדוגמאות ב-DBE לצורך שימוש עתידי.[1]

תיוג

פרוטוקול 3DISCO מתאים במיוחד לרקמות מקובעות המסומנות בפלואורופורים בוהקים, כגון מודלים מהונדסים גנטית המבטאים חלבונים פלואורניים כגון GFP[22]. פרוטוקול iDISCO שיפר אותו משמעותית כאשר הוסיף שלב מקדים של צביעה שניונית אימונוהיסטוכימית, המניבה דוגמאות בוהקות יותר וצילומים איכותיים ומפורטים יותר.[10]

יתרונות וחסרונות

התהליך כולו קל יחסית לביצוע ודורש רק החלפות של תמיסות נתונות ללא צורך בציוד מעבדה מותאם אישית. תהליך הציהור והדימות שבעקבותיו מהירים למדי (שעות עד ימים, תלוי בגודל הדגימה), במיוחד בהשוואה לשיטה אותה הם מחליפים – פריסת איבר שלם לחתכים רבים בעובי 30–50 מיקרון, צילום סדרתי של כל פרוסה ופרוסה ושחזור ממוחשב של האיבר המקורי[1][22] בנוסף, iDISCO עובד על סוגים רבים של רקמות, כגון ריאה, טחול, בלוטות לימפה, בלוטת חלב, וגידולים סרטניים.[1][10]

החסרונות העיקריים של שיטה זו הם הסרת חלק מהשומנים של הרקמה במהלך הציהור, שאינה מאפשרת להיעזר בצבעים המסיסים בשומן, התכווצות הרקמה במהלך הציהור,[22] פירוק חלקי של החלבונים הפלואורניים,[23] דהייה הדרגתית של הפלואורניות במהלך אחסון ארוך טווח,[1] רעילות המגיבים המשמשים בה וחשש לשיתוך (קורוזיה) של רכיבים אופטיים המצויים במגע תכוף עם נוזל ה-DBE.[24]

שינויים ויישומים

שימו לב כי פרק זה ממחיש פיתוח ושימוש בשיטות ניקוי מבוססות ממס ואינו מספק רשימה מלאה של יישומים ושינויים שלהן.

שינויים

שיטת 3DISCO אומצה זמן קצר לאחר פרסומה על ידי חוקרים אחרים ושונתה במטרה להשיג מטרות ספציפיות, כמו צביעה לאחור (אנ') של שלוחות עצביות (למשל באמצעות נגיפי כלבת מהונדסים גנטית),[25][26] צביעה שניונית באמצעות נוגדנים (iDISCO),[10] ציהור עכבר מומת שלם (uDISCO)[3] או ציהור דגימות משובצות בפרפין מקובעות בפורמלין (DIPCO).[8]

מחברי iDISCO (ראשי תיבות של "immunolabeling-enabled imaging of solvent-cleared organs") כללו טיפול מקדים של הדגימה עם מתנול, מי חמצן, דטרגנטים ודימתיל סולפוקסיד (DMSO) יחד עם סימון נוגדנים לפני הניקוי. תהליך מקדים זה מתגבר על שני חסרונות של סימון נוגדנים של דגימות גדולות. ראשית, הפחתת האוטופלואורסצנציה של הדגימות ושיפור יחס אות לרעש, ושנית, הפיכת הרקמה לחדירה יותר לנוגדנים. כתוצאה מכך, ניתן לצבוע בהצלחה דגימות בגודל של עוברי עכברים או איברי עכבר שלמים עם נוגדנים המסומנים בפלואורסצנציה ולאחר מכן לנקות אותן ולצלם אותן.[10]

מחברי uDISCO (מ-"ultimate imaging of solvent-cleared organs") מגבירים את הצטמקות הרקמה, תופעה נפוצה של צופים בהתייבשות הדגימה בשלב הראשון של הניקוי. הם השתמשו בטרט-בוטנול במקום THF לצורך התייבשות וגם בתמיסות שונות להדמיה, אשר שומרים על פלואורסצנציה טוב יותר מאשר DBE. הודות להתכווצות הרקמה, הם יכולים לצפות בדגימות גדולות עד לגודל של גוף עכבר שלם.[3] uDISCO זכה לתשומת לב רבה בכלי תקשורת ברחבי העולם, כולל הניו יורק טיימס,[27] וול סטריט ג'ורנל,[28] ביזנס אינסיידר,[29] מגזיני נייצ'ר וסיינס.[30] הוא גם נבחר לאחת מעשר התמונות המדעיות המובילות לשנת 2016 על ידי נייצ'ר.[31]

DIPCO (מ"אבחון איברים מנוקים המוטבעים בפרפין עם תווית אימונו") הוא תהליך המשלב דה-פרפיניזציה של דגימות גידול משובצות ב-FFPE, ניקוי iDISCO ופנוטיפיזציה של רקמת גידול. דגימות FFPE של גידולים מאוחסנות באופן נרחב בבנקים ביולוגיים ומשמשות לאבחון, וניתוח תלת-ממדי שלהן עשוי לסייע בשיפור הריבוד של חולי סרטן.[8]

יישומים

שיטות ציהור, כולל iDISCO, פותחו בעיקר למחקר מדעי המוח. הסיבה לכך היא המורכבות המבנית והתפקודית הגבוהה של מערכת העצבים. דימות של מוח שלם של עכבר בשיטות היסטולוגיה קלאסיות מצריך השקעה עצומה של זמן ומשאבים, בעוד ש-iDISCO מאפשרת לבחון עשרות מוחות עכברים במחקר השוואתי בודד.[22][32] לכן, רוב המחקרים מתמקדים במערכת העצבים המרכזית של עכברים (עכברי מעבדה הם אחד מאורגניזמי המודל השכיחים במדעי המוח). מחברי שיטת 3DISCO השתמשו בה תחילה לחקר התחדשות במערכת העצבים המרכזית (CNS) של עכברים, כולל ספירת מיקרוגליה, אסטרוציטים ומיפוי מסלולי אקסונים לאחר פגיעה.[2] 3DISCO שימש גם למיפוי התפתחות מערכת העצבים המרכזית של עכברים.[2] תצורת iDISCO משמשת לחקר ההקשר המבני של פעילות מוחית,[10] למיפוי משקעים עמילואידים במחלות ניווניות כגון אלצהיימר, נדידה של מיקרוגלייה כתוצאה מתהליכים דלקתיים במוח, מחלות כלי דם במוח ותכונות אחרות של המוח בחולי אלצהיימר ובמודלים של עכברים.[33] תצורת uDISCO שימש לאחר מכן למיפוי שלוחות עצביות של תאי עצב נבחרים במערכת העצבים המרכזית השלמה של עכברים – משימה שאינה מעשית בשיטות היסטולוגיה קלאסית.

השימוש בשיטות "DISCO" הורחב למחקר על רקמות רבות אחרות, כולל מיפוי של תאי גזע מושתלים באיברי עכבר שלמים,[3] דימות של עוברים אנושיים שלמים בשלבי התפתחות שונים[11] או בדיקה ואבחון של גידולים סרטניים אנושיים.[8]

הערות שוליים

  1. ^ 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 Ertürk, Ali; Becker, Klaus; Jährling, Nina; Mauch, Christoph P; Hojer, Caroline D; Egen, Jackson G; Hellal, Farida; Bradke, Frank; Sheng, Morgan (בנובמבר 2012). "Three-dimensional imaging of solvent-cleared organs using 3DISCO". Nature Protocols. 7 (11): 1983–1995. doi:10.1038/nprot.2012.119. ISSN 1750-2799. PMID 23060243. {{cite journal}}: (עזרה)
  2. ^ 2.0 2.1 2.2 Ertürk, Ali; Mauch, Christoph P.; Hellal, Farida; Förstner, Friedrich; Keck, Tara; Becker, Klaus; Jährling, Nina; Steffens, Heinz; Richter, Melanie (2011-12-25). "Three-dimensional imaging of the unsectioned adult spinal cord to assess axon regeneration and glial responses after injury". Nature Medicine. 18 (1): 166–171. doi:10.1038/nm.2600. ISSN 1546-170X. PMID 22198277. אורכב מ-המקור ב-2020-09-15.
  3. ^ 3.0 3.1 3.2 3.3 Pan, Chenchen; Cai, Ruiyao; Quacquarelli, Francesca Paola; Ghasemigharagoz, Alireza; Lourbopoulos, Athanasios; Matryba, Paweł; Plesnila, Nikolaus; Dichgans, Martin; Hellal, Farida (באוקטובר 2016). "Shrinkage-mediated imaging of entire organs and organisms using uDISCO". Nature Methods. 13 (10): 859–867. doi:10.1038/nmeth.3964. ISSN 1548-7105. PMID 27548807. אורכב מ-המקור ב-2020-09-15. {{cite journal}}: (עזרה)
  4. ↑ Espinosa-Medina, I.; Outin, E.; Picard, C. A.; Chettouh, Z.; Dymecki, S.; Consalez, G. G.; Coppola, E.; Brunet, J.-F. (2014-07-04). "Neurodevelopment. Parasympathetic ganglia derive from Schwann cell precursors". Science. 345 (6192): 87–90. doi:10.1126/science.1253286. ISSN 1095-9203. PMID 24925912.
  5. ↑ Acar, Melih; Kocherlakota, Kiranmai S.; Murphy, Malea M.; Peyer, James G.; Oguro, Hideyuki; Inra, Christopher N.; Jaiyeola, Christabel; Zhao, Zhiyu; Luby-Phelps, Katherine (2015-10-01). "Deep imaging of bone marrow shows non-dividing stem cells are mainly perisinusoidal". Nature. 526 (7571): 126–130. Bibcode:2015Natur.526..126A. doi:10.1038/nature15250. ISSN 1476-4687. PMC 4850557. PMID 26416744.
  6. ↑ Garofalo, Stefano; D'Alessandro, Giuseppina; Chece, Giuseppina; Brau, Frederic; Maggi, Laura; Rosa, Alessandro; Porzia, Alessandra; Mainiero, Fabrizio; Esposito, Vincenzo (2015-03-30). "Enriched environment reduces glioma growth through immune and non-immune mechanisms in mice". Nature Communications. 6. Bibcode:2015NatCo...6.6623G. doi:10.1038/ncomms7623. ISSN 2041-1723. PMC 4389244. PMID 25818172.
  7. ↑ Oshimori, Naoki; Oristian, Daniel; Fuchs, Elaine (2015-02-26). "TGF-β promotes heterogeneity and drug resistance in squamous cell carcinoma". Cell. 160 (5): 963–976. doi:10.1016/j.cell.2015.01.043. ISSN 1097-4172. PMC 4509607. PMID 25723170.
  8. ^ 8.0 8.1 8.2 8.3 Tanaka, Nobuyuki; Kanatani, Shigeaki; Tomer, Raju; Sahlgren, Cecilia; Kronqvist, Pauliina; Kaczynska, Dagmara; Louhivuori, Lauri; Kis, Lorand; Lindh, Claes (באוקטובר 2017). "Whole-tissue biopsy phenotyping of three-dimensional tumours reveals patterns of cancer heterogeneity". Nature Biomedical Engineering. 1 (10): 796–806. doi:10.1038/s41551-017-0139-0. ISSN 2157-846X. PMID 31015588. {{cite journal}}: (עזרה)
  9. ↑ Lafkas, Daniel; Shelton, Amy; Chiu, Cecilia; de Leon Boenig, Gladys; Chen, Yongmei; Stawicki, Scott S.; Siltanen, Christian; Reichelt, Mike; Zhou, Meijuan (2015-12-03). "Therapeutic antibodies reveal Notch control of transdifferentiation in the adult lung". Nature. 528 (7580): 127–131. Bibcode:2015Natur.528..127L. doi:10.1038/nature15715. ISSN 1476-4687. PMID 26580007.
  10. ^ 10.0 10.1 10.2 10.3 10.4 10.5 Renier, Nicolas; Wu, Zhuhao; Simon, David J.; Yang, Jing; Ariel, Pablo; Tessier-Lavigne, Marc (2014-11-06). "iDISCO: a simple, rapid method to immunolabel large tissue samples for volume imaging". Cell. 159 (4): 896–910. doi:10.1016/j.cell.2014.10.010. ISSN 1097-4172. PMID 25417164.
  11. ^ 11.0 11.1 Belle, Morgane; Godefroy, David; Couly, Gérard; Malone, Samuel A.; Collier, Francis; Giacobini, Paolo; Chédotal, Alain (2017-03-23). "Tridimensional Visualization and Analysis of Early Human Development". Cell. 169 (1): 161–173.e12. doi:10.1016/j.cell.2017.03.008. ISSN 1097-4172. PMID 28340341.
  12. ↑ Spalteholz, Werner (1914). Über das Durchsichtigmachen von menschlichen und tierischen Präparaten und seine theoretischen Bedingungen, nebst Anhang: Über Knochenfärbung. Leipzig: S. Hirzel. OCLC 11138774.
  13. ^ 13.0 13.1 Steinke, H.; Wolff, W. (2001). "A modified Spalteholz technique with preservation of the histology". Annals of Anatomy – Anatomischer Anzeiger. 183 (1): 91–95. doi:10.1016/s0940-9602(01)80020-0. PMID 11206989.
  14. ↑ Eitel, F.; Seibold, R.; Hohn, B.; Schweiberer, L. (ביולי 1986). "[Preparatory technical modification and standardization of the Spalteholz microangiographic study method]". Der Unfallchirurg. 89 (7): 326–336. ISSN 0177-5537. PMID 3529403. {{cite journal}}: (עזרה)
  15. ^ 15.0 15.1 Azaripour, Adriano; Lagerweij, Tonny; Scharfbillig, Christina; Jadczak, Anna Elisabeth; Willershausen, Brita; Noorden, Cornelis J.F. Van (2016). "A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue". Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2): 9–23. doi:10.1016/j.proghi.2016.04.001. PMID 27142295.
  16. ↑ Silvestri, Ludovico; Costantini, Irene; Sacconi, Leonardo; Pavone, Francesco Saverio (במרץ 2016). "Clearing of fixed tissue: a review from a microscopist's perspective". Journal of Biomedical Optics. 21 (8). Bibcode:2016JBO....21h1205S. doi:10.1117/1.jbo.21.8.081205. ISSN 1083-3668. PMID 27020691. {{cite journal}}: (עזרה)
  17. ↑ Dodt, Hans-Ulrich; Leischner, Ulrich; Schierloh, Anja; Jährling, Nina; Mauch, Christoph Peter; Deininger, Katrin; Deussing, Jan Michael; Eder, Matthias; Zieglgänsberger, Walter (באפריל 2007). "Ultramicroscopy: three-dimensional visualization of neuronal networks in the whole mouse brain". Nature Methods. 4 (4): 331–336. doi:10.1038/nmeth1036. ISSN 1548-7105. PMID 17384643. {{cite journal}}: (עזרה)
  18. ^ 18.0 18.1 Becker, Klaus; Jährling, Nina; Saghafi, Saiedeh; Weiler, Reto; Dodt, Hans-Ulrich (2012-03-30). "Chemical Clearing and Dehydration of GFP Expressing Mouse Brains". PLOS ONE. 7 (3). Bibcode:2012PLoSO...733916B. doi:10.1371/journal.pone.0033916. ISSN 1932-6203. PMC 3316521. PMID 22479475.
  19. ↑ Nicolas Renier, Zhuhao Wu, David J. Simon, Jing Yang, Pablo Ariel, Marc Tessier-Lavigne, iDISCO: A Simple, Rapid Method to Immunolabel Large Tissue Samples for Volume Imaging, Cell 159, 2014-11, עמ' 896–910 doi: 10.1016/j.cell.2014.10.010
  20. ↑ Genina, Elina A.; Bashkatov, Alexey N.; Tuchin, Valery V. (בנובמבר 2010). "Tissue optical immersion clearing". Expert Review of Medical Devices. 7 (6): 825–842. doi:10.1586/erd.10.50. ISSN 1745-2422. PMID 21050092. {{cite journal}}: (עזרה)
  21. ↑ Richardson, Douglas S.; Lichtman, Jeff W. (2015). "Clarifying Tissue Clearing". Cell. 162 (2): 246–257. doi:10.1016/j.cell.2015.06.067. PMC 4537058. PMID 26186186.
  22. ^ 22.0 22.1 22.2 22.3 22.4 22.5 Ertürk, Ali; Bradke, Frank (2013). "High-resolution imaging of entire organs by 3-dimensional imaging of solvent cleared organs (3DISCO)". Experimental Neurology. 242: 57–64. doi:10.1016/j.expneurol.2012.10.018. PMID 23124097.
  23. ↑ Hama, Hiroshi; Hioki, Hiroyuki; Namiki, Kana; Hoshida, Tetsushi; Kurokawa, Hiroshi; Ishidate, Fumiyoshi; Kaneko, Takeshi; Akagi, Takumi; Saito, Takashi (באוקטובר 2015). "ScaleS: an optical clearing palette for biological imaging". Nature Neuroscience. 18 (10): 1518–1529. doi:10.1038/nn.4107. ISSN 1546-1726. PMID 26368944. {{cite journal}}: (עזרה)
  24. ↑ Lloyd-Lewis, Bethan; Davis, Felicity M.; Harris, Olivia B.; Hitchcock, Jessica R.; Lourenco, Filipe C.; Pasche, Mathias; Watson, Christine J. (2016-12-13). "Imaging the mammary gland and mammary tumours in 3D: optical tissue clearing and immunofluorescence methods". Breast Cancer Research. 18 (1): 127. doi:10.1186/s13058-016-0754-9. ISSN 1465-542X. PMC 5155399. PMID 27964754.
  25. ↑ Launay, Pierre-Serge; Godefroy, David; Khabou, Hanen; Rostene, William; Sahel, Jose-Alain; Baudouin, Christophe; Parsadaniantz, Stéphane Melik; Goazigo, Annabelle Reaux-Le (2015). "Combined 3DISCO clearing method, retrograde tracer and ultramicroscopy to map corneal neurons in a whole adult mouse trigeminal ganglion" (PDF). Experimental Eye Research. 139: 136–143. doi:10.1016/j.exer.2015.06.008. PMID 26072022.
  26. ↑ Žygelytė, Emilija; Bernard, Megan E.; Tomlinson, Joy E.; Martin, Matthew J.; Terhorst, Allegra; Bradford, Harriet E.; Lundquist, Sarah A.; Sledziona, Michael; Cheetham, Jonathan (2016). "RetroDISCO: Clearing technique to improve quantification of retrograde labeled motor neurons of intact mouse spinal cords". Journal of Neuroscience Methods. 271: 34–42. doi:10.1016/j.jneumeth.2016.05.017. PMC 5620662. PMID 27268155.
  27. ↑ Fleur, Nicholas St (2016-08-22). "Seeing Through to a Mouse's Nervous System". The New York Times. ISSN 0362-4331.
  28. ↑ Hernandez, Daniela (2016-08-22). "New Technique Shrinks, Makes Small Animals Transparent". Wall Street Journal. ISSN 0099-9660.
  29. ↑ "A 'revolutionary' new technology can turn mice clear — and might one day map your brain". Business Insider Deutschland.
  30. ↑ "Scientists can see through these rodents". Science | AAAS. 2016-08-22.
  31. ↑ Cressey, Daniel (2016-12-22). "2016 in pictures: The best science images of the year". Nature. 540 (7634): 500–505. Bibcode:2016Natur.540..500C. doi:10.1038/540500a. PMID 30905960.
  32. ↑ Belle, Morgane; Godefroy, David; Dominici, Chloé; Heitz-Marchaland, Céline; Zelina, Pavol; Hellal, Farida; Bradke, Frank; Chédotal, Alain (2014). "A Simple Method for 3D Analysis of Immunolabeled Axonal Tracts in a Transparent Nervous System". Cell Reports. 9 (4): 1191–1201. doi:10.1016/j.celrep.2014.10.037. PMID 25456121.
  33. ↑ Liebmann, Thomas; Renier, Nicolas; Bettayeb, Karima; Greengard, Paul; Tessier-Lavigne, Marc; Flajolet, Marc (2016). "Three-Dimensional Study of Alzheimer's Disease Hallmarks Using the iDISCO Clearing Method". Cell Reports. 16 (4): 1138–1152. doi:10.1016/j.celrep.2016.06.060. PMC 5040352. PMID 27425620.

IDISCO43275582Q55602799

אוחזר מתוך "https://www.hamichlol.org.il/w/index.php?title=IDISCO&oldid=3762464"